| ID | 96884 |
| タイトルヨミ | シシュウ ビョウゲンセイ サイキン Eikenella corrodens ノ フチャク インシ フクゴウタイ オ コウセイスル タンパクシツ ノ ブンシ セイブツガクテキ カイセキ
|
| 著者 | |
| 資料タイプ |
学位論文
|
| 抄録 | Eikenella corrodens 1073は、菌体表層にN-アセチル-D-ガ
ラクトサミンに特異的なレクチン様付着因子(EcLS)を有し、これ を介して様々な宿主細胞表面に付着する。本研究では、EcLSを構 成する2種類の蛋白質をコードする遺伝子をクローニングした。 EcLSは、還元条件下でのSDS-PAGE解析により、約300kDaと 45kDaの蛋白質に分離した。初めに、この45kDa蛋白質をコード する遺伝子(porA)をPCRおよびサザンハイブリダイゼーションに よりクローニングした。これを発現ベクタ-pET22 b(+)にリクロ ーニングし、T7発現システムを用いてporA遺伝子産物を誘導発現 させた。そして、発現した45kDa蛋白質を封入体様の不溶性画分 から可溶化した後、精製した。このクローン化断片のDNA塩基配 列を決定し、一つのオープンリーデイングフレーム(0RF)を発見 した。このORFは、990塩基対から成り、330アミノ酸のポリペプ チド(分子量:35，748)をコードしていた。DNA塩基配列から予 想されるアミノ酸配列は、様々な病原活性を示すことが知られてい るNeisseria属のporin蛋白質のアミノ酸配列と高い相向性を認め た。また、porA遺伝子はゲノミックサザンハイブリダイゼーショ ンにより、E. corrodens内で1073株に特異的に認められた。 次に、E. coli JM109に導入したE. corrodens 1073染色体 DNAライブラリーから、抗EcLSモノクローナル抗体に特異的に反 応する蛋白質をコードする遺伝子をクローニングした。このクロー ンは3種類(約60kDa，25kDa，10kDa)のEikenella由来の蛋白 質を発現していたが、このうち25kDa蛋白質のみがイムノブロッ ト解析より抗EcLSモノクローナル抗体に特異的に反応した。この クローン化断片の欠失解析を行い、25kDa蛋白質発現に必要な領 域を特定し、その領域のDNA塩基配列を決定した。その結果、一 つのORFが見つかり、このORFは678塩基対から成り、226アミ ノ酸のポリペプチド(分子量:24，586) をコードしていることが 明らかとなった。DNA塩基配列から予想されるアミノ酸配列は、 データベース中の既知の蛋白質との相向性は認められなかった。発 現した25kDa蛋白質を封入体様の不溶性画分から可溶化した後、 精製した。この精製蛋白質のN末端のアミノ酸配列およびハイドロ パシー解析から、この25kDa蛋白質は外膜結合型蛋白質であるこ とが示唆された。 本研究結果より、E. corrodens 1073からクローニングされた 45kDaおよび25kDa蛋白質は、ともに外膜上でEcLS複合体を構成 する蛋由貿であり、さらに1) 45kDa蛋白質はレクチン様付着因子 本体を菌体表層に固定化するほか、主要抗原および歯周病原性因子 として機能する可能性があること、2) 25kDa蛋白質はEcLS複合 体のマイナーサプユニットで、レクチン様付着因子本体に近接して 局在する外膜結合型蛋白質であること、が示唆された。 |
| 備考 | 画像データは国立国会図書館から提供(2012/3。JPEG2000形式を本学でpdfに変換して公開)
|
| フルテキストファイル | |
| 言語 |
jpn
|
| 文科省報告番号 | 甲第795号
|
| 学位記番号 | 甲歯第98号
|
| 学位授与年月日 | 1996-03-26
|
| 学位名 |
博士（歯学）
|
| 部局 |
病院
|
